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非变性细胞裂解缓冲液现货

非变性细胞裂解缓冲液现货

简要描述:货  号:P1016
名  称:非变性细胞裂解缓冲液现货
规  格:100ml
价  格:220.00

产品型号:

所属分类:缓冲液

更新时间:2016-12-16

厂商性质:经销商

详情先容

非变性细胞裂解缓冲液现货

产品概况:

 

产品编号

产品名称

产品包装

产品价格

P1016

非变性蛋白裂解液

100ml

220.00

 

非变性细胞裂解缓冲液(Nondenaturing Lysis Buffer)内含非离子型去垢剂、盐、和蛋白磷酸酶抑制剂,能裂解细胞并在非变性条件下释放胞浆蛋白和可溶性膜蛋白、核蛋白。非变性条件下的裂解蛋白产物zui大限度地保留了蛋白的特性和功能,如抗原-抗体结合或酶学活性,因此适宜于进行免疫共沉淀。另外,有些抗体对非变性蛋白具有更高的结合能力或只能识别非变性蛋白的抗原位点,这种情况应该使用非变性裂解。

    非变性细胞裂解缓冲液的主要成分为20mM Tris(pH7.5)150mM NaCl1% Triton X-1001% NP-40以及2mM sodium pyrophosphate25mM β-glycerophosphate1mM EDTA1mM Na3VO40.5 ug/ml leupeptin等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白的降解,并维持原有的蛋白间相互作用。
    非变性蛋白裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的Triton X-100等干扰物质,不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

包装清单:

产品编号

产品名称

包装

P1016

非变性蛋白裂解液

100ml

 

PMSF100mM

1.5ml

 

说明书

1

保存条件:
    -20℃保存,一年有效。
注意事项:
    为取得*的使用效果,尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。裂解样品的所有步骤都需在冰上或4进行。
    关于裂解液的选择,一方面可以参考大家生产的各种裂解液主要特点、差异,选择合适的裂解液;另一方面也需要通过一些预实验来摸索*的适合您实验条件的裂解液。
    为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

非变性细胞裂解缓冲液现货使用说明:
对于培养细胞样品:
1. 融解非变性蛋白裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的zui终浓度为1mM
2. 对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照6孔板每孔加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后,细胞就会被裂解。
   对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/管,然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分,而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触,相对比较容易裂解充分。
3. 充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGEWestern、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
   裂解液用量说明:通常6孔板每孔细胞加入100微升裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到150微升或200微升。
对于组织样品:
1. 把组织剪切成细小的碎片。
2. 融解非变性蛋白裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的zui终浓度为1mM
3. 按照每20毫克组织加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。)
4. 
用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
5. 充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGEWestern、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
6. 如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

附:大家生产的各种裂解液主要特点、差异和选择
首先请参考下表,了解各种裂解液的主要特点和差异。

产品编号

P1001

P1002

P1004

P1006

P1010

P1012

产品名称

WesternIP细胞裂解液

RIPA裂解液()

RIPA裂解液()

RIPA裂解液()

NP-40裂解液

SDS裂解液

有效裂解成分

1% Triton X-100

1% Triton X-100, 1% deoxycholate, 0.1% SDS

1% NP-40, 0.5% deoxycholate, 0.1% SDS

1% NP-40, 0.25% deoxycholate

1% NP-40

1% SDS

裂解强度

温和

温和

温和

对膜蛋白的提取

一般

很好

较好

一般

一般

很好

对胞浆蛋白的提取

很好

很好

很好

很好

很好

很好

对核蛋白的提取

较好

很好

较好

较好

较好

很好

胞浆磷酸化蛋白提取

很好

很好

很好

很好

很好

很好

细胞核转录因子提取

很好

很好

很好

很好

很好

很好

含蛋白酶抑制剂

含磷酸酯酶抑制剂

主要用途

WB, IP,co-IP

WB, IP

WB, IP

WB, IP, co-IP

WB, IP,co-IP

WB, ChIP

   

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

用于普通的Western、IP或co-IP,大家推荐使用Western及IP细胞裂解液(P1001),该裂解液已被国内各大研究机构广泛使用,用户普遍反映很好。裂解细胞或组织后,没有非常粘滞的透明状DNA团块形成,不必采用超声处理等就可以非常理想地用于后续操作。 另外该裂解液裂解的产物也适合用于磷酸化蛋白的Western检测。 
    对于某些特殊蛋白的IP,如果发现Western及IP细胞裂解液(P1001)效果不是非常理想,可以尝试用RIPA裂解液(强、中或弱)或NP-40裂解液。如果发现IP的时候背景很高,即非特异的蛋白也被IP下来,则需要选用裂解强度较高的裂解液,例如RIPA裂解液(强或中)。如果发现目的蛋白无法被IP下来,则说明裂解液的强度过强,可以使用较为温和的裂解液例如RIPA裂解液(弱)或NP-40裂解液。
    对于某些难溶解蛋白的Western,如果发现Western及IP细胞裂解液(P1001)效果不是非常理想,可以尝试使用裂解强度更高的裂解液例如RIPA裂解液(强、中)或SDS裂解液。



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