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聚丙烯酰胺凝胶DNA回收试剂盒

聚丙烯酰胺凝胶DNA回收试剂盒
聚丙烯酰胺凝胶DNA回收试剂盒

货  号:D0012
名  称:聚丙烯酰胺凝胶DNA回收试剂盒
规  格:20T/50T
价  格:280.00/480.00

产品型号:

联系方式

86-021-65672052

产品先容

聚丙烯酰胺凝胶DNA回收试剂盒使用说明书
DNA回收试剂盒使用说明书(PAGE回收)

试剂组成

20T

50T

溶胶液

5ml

15ml

结合液

20ml

50ml

漂洗液

15ml

15ml

洗脱液

1.5ml

5ml

研磨杵

20个

50个

过滤柱

20套

50套

吸附柱

20套

50套

本试剂盒采用可以高效、专一结合DNA的硅基质材料和独特的缓冲液系统,从聚丙烯酰胺凝胶上回收DNA片段,同时除去蛋白质、其它有机化合物、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质。使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、文库筛

选、连接和转化等实验。配以特制的研磨杵和过滤柱,使你的操作更方便。

操作步骤:(所有离心步骤均可使用台式离心机在室温下离心)

*次使用前请先在15ml漂洗液中加入60ml无水乙醇。

1、将单一的目的DNA条带从聚丙烯酰胺凝胶中切下(尽量切除多余部分),放入1.5ml离心管中,称取重量,用研磨杵将胶尽量挤压碎。加入2倍体积的溶胶液吹打混匀(每100mg胶加入200ul溶胶液),75℃水浴30分钟。

2、用1ml的去尖吸头汲取混合物至过滤柱中(将胶一起吸入,溶液过多时可分次加入)。13,000rpm离心1分钟。将收集管中的滤出液转入新离心管。

3、取六倍体积结合液加入原离心管(每100mg胶加入600ul),清洗管壁后加入过滤柱中(溶液过多时可分次加入),颠倒过滤柱或轻轻吹打几次混匀,13,000rpm离心1分钟。将两次收集的滤出液混合。

4、将总滤出液混匀后加入吸附柱中(溶液过多时可分次加入),13,000rpm离心30-60秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放入收集管中。

5、向吸附柱中加入600μl漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),13,000rpm离心30-60秒,倒掉废液,将吸附柱重新放入收集管中。

6、向吸附柱中加入600μl漂洗液,13,000rpm离心30-60秒,倒掉废液。

7、将离心吸附柱放回收集管中,13,000rpm离心2分钟,尽量除去漂

洗液。将吸附柱开盖置于室温3-5分钟,彻底晾干,以防止残留的漂洗液影响下一步的实验。

8、将吸附柱放到一个干净离心管中,向吸附膜中间位置悬空滴加适量65–70℃预热的洗脱缓冲液(20-30μl),室温放置2分钟。13,000rpm离心2分钟收集DNA溶液。

注意:①为了增加回收效率,可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,13,000rpm再次离心1分钟。
      ②洗脱缓冲液体积不应少于20μl,体积过小影响回收效率。
      ③洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5之间。

9、DNA回收产物直接下一步实验或者-20℃保存。

注意事项:

1、电泳时使用新的电泳缓冲液,以免影响电泳和回收效果。

2、切胶时,紫外照射时间应尽量短,以免对DNA造成损伤。

3、本试剂盒对<50bpDNA片段回收效率偏低(30%左右),如想回

收,应加大结合液的体积,延长吸附和洗脱的时间。

4、回收率与初始DNA量和洗脱体积有关,初始量越少、洗脱体积越

小,回收率越低。

产品相关关键字: dna凝胶回收

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