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Western及IP细胞裂解液 BL509A

Western及IP细胞裂解液 BL509A

简要描述:Western及IP细胞裂解液 BL509A
产品编号:BL509A
产品规格:100ml
产品品牌:Biosharp
产品价格:280.00

产品型号:

所属分类:Biosharp白鲨生物科技

更新时间:2016-12-27

厂商性质:经销商

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Western及IP细胞裂解液 BL509A 现货

Western 及 IP 细胞裂解液 产品编号 产品名称 规格 BL509A Western 及 IP 细胞裂解液 100 ml 别名:Cell lysis buffer for Western and IP 产品概况: Western 及 IP 细胞裂解液(Cell lysis buffer for Western and IP),是一种在非变性条件下裂 解细胞的裂解液。本细胞裂解液裂解的细胞,可以用于 PAGE,Western,免疫沉淀(immunol precipitation,IP)和免疫共沉淀(co-IP)。 Western 及 IP 细胞裂解液的主要成分为 20mM Tris (pH7.5),150mM NaCl,1% Triton X-100,以及 sodium pyrophosphate,β-glycerophosphate,EDTA,Na3VO4,leupeptin 等多种 抑制剂。可以有效抑制蛋白的降解,并维持原有的蛋白间相互作用。 用 Western 及 IP 细胞裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用 BCA 蛋白浓度测定试剂盒 测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的 Triton X-100 等干扰物质,不能用 Bradford 法测定 由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。 使用说明: 对于培养细胞样品: 1、融解 Western 及 IP 细胞裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加 入 PMSF,使 PMSF 的zui终浓度为 1mM。 2、对于贴壁细胞:去除培养液,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(若血清中 的蛋白没有干扰,可不洗)。按照 6 孔板每孔加入 100-200 微升裂解液的比例加入裂解液。 用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞 1-2 秒后,细胞就会被裂 解。 对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照 6 孔板每孔细胞加入 100-200 微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应无 明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成 50-100 万细胞/管后再裂解。大团的细胞 较难裂解充分,而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触,相对比较容易裂解充分。 3、充分裂解后,10000-14000g 离心 3-5 分钟,取上清,即可进行后续的 PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。 裂解液用量说明:通常 6 孔板每孔细胞加入 100 微升裂解液已经足够,但如果细胞密度 非常高可以适当加大裂解液的用量 到 150 微升或 200 微升。 对于组织样品: 1、把组织剪切成细小的碎片。 2、融解 Western 及 IP 细胞裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加 入 PMSF,使 PMSF 的zui终浓度为 1mM。 3、按照每 20 毫克组织加入 100-200 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分 可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。) 4、用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。 5、充分裂解后,10000-14000g 离心 3-5 分钟,取上清,即可进行后续的 PAGE、Western、 免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。 6、如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈 vortex 使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不 必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。 注意事项: 1、为取得*的使用效果,尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。 2、需自备 PMSF。PMSF(ST506)可以向碧云天订购。 3、裂解样品的所有步骤都需在冰上或 4℃进行。 4、可能需要通过一些预实验来摸索*的适合您实验条件的裂解液。 5、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 保存条件: -20℃保存,一年有效。

Western及IP细胞裂解液 BL509A 现货

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