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IPTG溶液 50mg/ml BL545A

IPTG溶液 50mg/ml BL545A

简要描述:IPTG溶液 50mg/ml BL545A 现货
产品编号:BL545A
产品规格:5ml
产品品牌:Biosharp
产品价格:60.00

产品型号:

所属分类:Biosharp白鲨生物科技

更新时间:2016-12-30

厂商性质:经销商

详情先容

IPTG溶液 50mg/ml BL545A 现货

IPTG/X-Gal 即用型溶液 产品编号 产品名称 规格 BL545A IPTG 50 mg/ml 5 ml BL546A X-Gal 20 mg/ml 5 ml 产品概况: 蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法。现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA 的短区段,其中有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的调控序列和前146个氨基酸的编码信息。在这 个编码区中插入了一个多克隆位点(MCS),它并不破坏阅读框,但可使少数几个氨基酸插 入到β-半乳糖苷酶的氨基端而不影响功能,这种载体适用于可编码β-半乳糖苷酶C端部分序 列的宿主细胞。因此,宿主和质粒编码的片段虽都没有酶活性,但它们同时存在时,可形成 具有酶学活性的蛋白质。这样,lacZ基因在缺少近操纵基因区段的宿主细胞与带有完整近操 纵基因区段的质粒之间实现了互补,称为α-互补。由α-互补而产生的LacZ +细菌在诱导剂IPTG 的作用下,在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落,因而易于识别。然而,当外源DNA插入到 质粒的多克隆位点后,几乎不可避免地导致无α-互补能力的氨基端片段,使得带有重组质粒 的细菌形成白色菌落。这种重组子的筛选,又称为蓝白斑筛选。如用蓝白斑筛选则经连接产 物转化的钙化菌平板37℃倒置培养12-16hr后,含有插入片段重组质粒的细菌形成白色菌落, 而没有插入片段的质粒细菌形成蓝色菌落。 配制方法: 50mg/ml IPTG 5 ml:取250 mg IPTG,溶于5 ml无菌水中,过滤除菌后-20℃贮存。 20mg/ml X-Gal 5 ml:取100 mg X-gal,溶于5 ml 二甲基甲酰胺(DMF),棕色瓶中-20℃ 贮存。此试剂无需灭菌。 实验程序: 1、转化平板的制备: 向铺好的含有相应抗生素的固体琼脂平板表面加入16 µl的IPTG(50 mg/ml)、40 µl的X-gal (20 mg/ml),使用无菌的弯头玻璃棒将其均匀的涂开,尽量使溶解X-gal的二甲基甲酰胺挥发 干净。 2、转化 (1)取部分连接产物加到50-100 µl感受态细胞中(感受态细胞应刚从-70℃冰箱取出放 于冰浴上,待刚刚解冻时加入连接产物,连接产物的加入量不超过感受态细胞体积的十分之 一),轻弹混匀,冰浴30分钟。

(2)将离心管置于精确42℃水浴90秒,取出管后马上置于冰浴中放置2-3分钟,其间不 要摇动离心管。 (3)向离心管中加入250-500 µl 37℃预热的SOC或LB(不含抗生素)培养基,150rpm,37℃ 振荡培养45分钟。此步目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。 (4)将离心管中的菌液混匀,汲取100 μl加到含相应抗生素的SOB或LB固体琼脂培养基 上,用无菌的弯头玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。待平板表面干燥后,倒置平板,37℃培养12-16 小时。 3、检测 将得到的白色菌落接种 1-5 ml LB 培养基,37℃摇床振荡培养整夜,保存菌种后提取质 粒,应用 PCR 或酶切方法鉴定插入片段是否正确。 保存条件: -20℃保存,至少一年有效。

 

IPTG溶液 50mg/ml BL545A 现货

 

货号品名规格品牌报价
 常用试剂以及PH缓冲液   
BL510ADEPC水100mlBiosharp40
BL514A1M Tris-HCl溶液,pH6.8100mlBiosharp50
BL515A1M Tris-HCl溶液,pH8.8100mlBiosharp50
BL516A1.5M Tris-HCl溶液,pH8.8100mlBiosharp60
BL517A10% SDS溶液100mlBiosharp50
BL518A0.5M EDTA pH8.0500mlBiosharp120
BL537A1M Tris-HCl,pH7.6100mlBiosharp30
BL538A1M Tris-HCl,pH8.0100mlBiosharp30
BL601APBS缓冲液(即用型干粉)2LBiosharp10
BL604A枸橼酸缓冲液(即用型干粉)1LBiosharp10
BL531ATE Buffer100mlBiosharp40
BL541A3M 醋酸钠 pH5.2100mlBiosharp50 
BL542A5M NaCl100mlBiosharp50 
BL543ARNaseA 10ml/ml1mlBiosharp60 
BL550A1×PBS缓冲液(pH7.2- 7.4)500mlBiosharp70
BL551A10×PBS缓冲液(pH7.2- 7.4)500mlBiosharp90
BL552A1M DTT溶液1mlBiosharp60
 基因克隆   
BL545AIPTG溶液 50mg/ml5mlBiosharp60 
BL546AX-gal溶液 20mg/ml5mlBiosharp80 

现货

 



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